無菌室實驗(yan)操作過程中要注意什么？有哪些必須遵守(shou)的條(tiao)件？

一、無菌室的級別：

根據空(kong)氣(qi)潔(jie)凈度(du)的(de)不同，無菌(jun)室可分為哪(na)幾(ji)個級(ji)別一般情況(kuang)下，無菌(jun)室的(de)等級(ji)有(you)百(bai)級(ji)，千級(ji)，萬(wan)級(ji)，十萬(wan)級(ji)，百(bai)萬(wan)級(ji)等等。

凈化(hua)等級(ji)(ji)一般分為100級(ji)(ji)、1000級(ji)(ji)、10000級(ji)(ji)、100000級(ji)(ji)，現(xian)在2010年版的(de)GMP 凈化(hua)車(che)間已經不用這個(ge)叫法(fa)了，分為ABCD級(ji)(ji)別(bie)(bie)，分別(bie)(bie)相對應于98版的(de)幾個(ge)級(ji)(ji)別(bie)(bie)，通過檢(jian)測區(qu)域內的(de)塵埃粒(li)子數、浮游菌數、沉降均數評價凈化(hua)級(ji)(ji)別(bie)(bie)，各個(ge)級(ji)(ji)別(bie)(bie) 有不同的(de)要求，凈化(hua)等級(ji)(ji)分靜態、動態兩種。

無菌室設(she)計建設(she)要(yao)點：

無(wu)菌(jun)室(shi)內的地面、墻(qiang)壁必須平(ping)整，不(bu)易藏污納垢，便于(yu)清洗。工作臺的臺面應該處于(yu)水平(ping)狀態(tai)。無(wu)菌(jun)室(shi)和(he)緩沖間都裝(zhuang)有(you)紫外線燈，無(wu)菌(jun)室(shi)的紫外線燈距離工作臺面 1 米。工作人員進入(ru)無(wu)菌(jun)室(shi)應穿滅過菌(jun)的服裝(zhuang)，戴帽子。

當(dang)前無(wu)菌(jun)室(shi)多存在于微生(sheng)物工(gong)廠，一般實驗室(shi)則使用(yong)超凈(jing)臺(tai)。超凈(jing)臺(tai)其主要功能是利用(yong)空(kong)(kong)氣(qi)(qi)層流裝置排(pai)除工(gong)作(zuo)臺(tai)面上部包(bao)括微生(sheng)物在內的各種(zhong)微小(xiao)塵埃。通過電(dian)動裝置使空(kong)(kong)氣(qi)(qi)通過高(gao)效過濾器具后進入工(gong)作(zuo)臺(tai)面，使臺(tai)面始(shi)終保持(chi)在流動無(wu)菌(jun)空(kong)(kong)氣(qi)(qi)控制之下。而且(qie)在接近外部的一方有一道高(gao)速流動的氣(qi)(qi)簾防止外部帶菌(jun)空(kong)(kong)氣(qi)(qi)進入。

在條件(jian)較困難的(de)地方，也可以用木制無菌箱(xiang)代替(ti)超凈臺。

無(wu)菌箱(xiang)結構簡單，便于移動，箱(xiang)正面(mian)開有(you)兩個洞，不操(cao)(cao)作時用(yong)推(tui)拉式小門(men)擋住，操(cao)(cao)作時可(ke)以將(jiang)雙(shuang)臂伸進去。正面(mian)上部(bu)裝有(you)玻(bo)璃，便于在內部(bu)操(cao)(cao)作，箱(xiang)內部(bu)裝有(you)紫外線(xian)燈(deng)，從(cong)側面(mian)小門(men)可(ke)以放進去器(qi)具(ju)和菌種(zhong)等。

二、無菌室操作規范

1.無菌室應(ying)保持清(qing)潔，嚴禁(jin)堆放(fang)雜物，以防污染(ran)。

2.嚴防一(yi)切(qie)滅菌器材和(he)培養基污(wu)染，已污(wu)染者應停止(zhi)使用。

3.無菌室(shi)應(ying)備(bei)有工(gong)作濃(nong)度的(de)(de)消毒液，如5%的(de)(de)甲(jia)酚溶(rong)液，70%的(de)(de)酒精，0.1%的(de)(de)新潔(jie)爾滅溶(rong)液，等(deng)等(deng)。

4.無(wu)菌室應(ying)定期用適宜(yi)的消毒(du)液(ye)滅菌清潔(jie)，以保證無(wu)菌室的潔(jie)凈(jing)度符合要求。

5.需要(yao)帶入無菌室使用(yong)的(de)儀器(qi)(qi)，器(qi)(qi)械，平皿等一切物品，均應包扎(zha)嚴(yan)密，并應經過適(shi)宜(yi)的(de)方(fang)法(fa)滅(mie)菌。

6.無菌(jun)(jun)(jun)室(shi)使用前必須(xu)打(da)開無菌(jun)(jun)(jun)室(shi)的(de)紫(zi)外燈輻(fu)照(zhao)滅菌(jun)(jun)(jun)30分鐘(zhong)(zhong)以上，并(bing)且同時(shi)打(da)開超(chao)凈(jing)臺進行吹風。操(cao)作完畢，應及時(shi)清理無菌(jun)(jun)(jun)室(shi)，再(zai)用紫(zi)外燈輻(fu)照(zhao)滅菌(jun)(jun)(jun)20分鐘(zhong)(zhong)。

7.無(wu)菌(jun)室(shi)應每(mei)月檢(jian)查菌(jun)落數(shu)。在超凈工作臺開啟(qi)的狀態下，取(qu)(qu)內徑90mm的無(wu)菌(jun)培(pei)養(yang)皿若干(gan)，無(wu)菌(jun)操作分別注入融化并冷(leng)卻(que)至約45℃的營養(yang)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)約15mL，放(fang)至凝固(gu)后，倒置(zhi)于(yu)30-35℃培(pei)養(yang)箱(xiang)培(pei)養(yang)48小時，證明(ming)無(wu)菌(jun)后，取(qu)(qu)平(ping)板(ban)3-5個(ge)，分別放(fang)置(zhi)工作位置(zhi)的左中右等(deng)處(chu)，開蓋暴露30分鐘后，倒置(zhi)于(yu)30-35℃培(pei)養(yang)箱(xiang)培(pei)養(yang)48小時，取(qu)(qu)出檢(jian)查。100級潔凈區平(ping)板(ban)雜菌(jun)數(shu)平(ping)均不得超過1個(ge)菌(jun)落，10000級潔凈室(shi)平(ping)均不得超過3個(ge)菌(jun)落。如超過限度，應對無(wu)菌(jun)室(shi)進行徹底(di)消毒，直至重(zhong)復檢(jian)查合乎要(yao)求(qiu)為(wei)止。